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隐匿性乙型肝炎病毒熏染的检测及其临床应用价值

HBV熏染而乙型肝炎病毒外貌抗原(HBsAg)阴性很难用通例检测要领检出，是较为重大的盛行病学和临床课题之一。HBsAg和HBV DNA血液筛查和预防接种至关主要。然而，盛行病学对隐匿性乙型肝炎病毒熏染(occult hepatitis B virusinfection，OBI)的研究主要集中于差别人群OBI患病率的横断面视察，鉴于研究工具的选取要领纷歧及检测指标和手段等的差别，效果差别很大。OBI作为一种特殊形式的熏染类型，正逐渐受光临床医师及患者的高度重视。随着社会、经济的生长，人们对康健及诊疗水平提出了更高的要求与期盼，特殊是对临床及医学磨练OBI提出了更高的要求。本文就OBI的熏染机制、生物学特征及临床特征作简要概述。

1 隐匿性乙型肝炎(OHB)

隐匿性乙型肝炎(OHB)是指除血清转换前的时机性“窗口”(window of opportunity)外，血清和(或)肝组织内HBV DNA(+)而HBsAg(-)或通例要领(如ELISA等)无法检测到，伴或不伴抗-HBc或抗-HBs，是HBV熏染的一种特殊形式。其爆发气制尚未明确，多以输血、母(父)婴、器官移植等方法撒播，且与慢性肝病、肝细胞癌(HCC)的爆发、生长及治疗亲近相关，对公共卫生学具有主要价值。近年，聚合酶链反应(PCR)手艺的普遍开展与应用，特殊是是外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)中HBV DNA的检测，为OBI的真实保存提供了更多更为确切的信息。

2 OBI的爆发缘故原由及影响其检出的因素

2.1 OBI的爆发具有多种机制

2.1.1 HBV DNA复制水平低是OBI爆发的缘故原由之一

OBI的保存和临床意义已经被许多研究所证实，现在已有大宗研究最先关注其爆发气制。临床上，OBI保存多种形式，如肝功正常、HBsAg(-)者，可在急性HBV熏染恢复后，也可能在慢性乙型肝炎(CHB)患者自觉或使用抗病毒药物后泛起。OBI者肝脏HBV DNA水平一样平常低于105拷贝/ml。

2.1.2 HBV基因变异致现有试剂难以检出HBsAg

OBI与抗-HBs(-)、抗-HBs低水平或孕产妇高病毒载量和逃避S基因突变有关。病毒变异是致OBI爆发的缘故原由之一，除少数HBsAg变异无法被检测试剂所辨识外，大都变异可以同野毒株一样被辨识，大大都OBI是由于HBV DNA的低水平复制所致。现在，研究主要集中在S基因，而X基因是转录、反转录和正链合成的起点，此处变异可能会影响病毒的转录和复制，但由于X基因结构和功效的重大性，对其变异与OBI的关系研究相对较少。

2.2 宿主免疫应答异常

HBV熏染的转归取决于病毒复制和机体免疫系统的相互作用与平衡，细胞免疫介导的免疫应答是中止HBV DNA复制的主要机制。HBV生涯周期中爆发的共价闭合环状DNA分子(ccc DNA)作为附加体保存于细胞核中，仍然作为与OBI有关的分子基础以及基因转录的模板。隐匿性HBV携带者HBsAg(-)状态是强盛的抑制病毒复制的机制，可能是由于宿主的免疫反应，合并熏染其他熏染性病原体和遗传因素等所致。

2.3 受其他病毒熏染的滋扰

对合并OBI的丙型肝炎病毒(HCV)慢性熏染者举行抗逆转录病毒治疗(antiretroviral therapy，ART)时，随着HCV RNA复制被抑制，HBV DNA载量却在增添。HBV和HCV混淆熏染肝细胞中HBV DNA水平低于纯粹HBV熏染的肝细胞，混淆熏染时保存相互滋扰、抑制，血清HBsAg表达通常被延迟，且水平相对较低、一连时间相对较短，可能与HCV焦点卵白抑制HBV相关。熏染血吸虫也能抑制肝实质细胞HBV DNA的复制。另外，恒久饮酒可以降低HBV DNA的表达，可以部分诠释HBsAg(-)酗酒者中HBV DNA(+)的高爆发率。

2.4 检测试剂的迅速度和质量问题

血清HBV DNA特异性抗原或抗体水平低于该试剂盒检测的迅速度时，乙型肝炎病毒血清学标记物(hepatitis B virusmarkers，HBV-M)常会漏检。

3 OBI检测的金标准

动物实验也证实保存OBI。HBV DNA PCR检测是检测OBI的金标准。确立OBI的诊断，需对HBVDNA基因组的差别区段扩增并重复检测。研究批注，OBI为二次隐性熏染(SOI)，这种形式的剩余熏染是一种常见的、恒久的效果。也有研究批注，OBI可以增进肝纤维化及肝硬化的爆发与希望。血液透析患者预防HBV熏染仍然是重大挑战。一些地区OBI在血液透析患者中普遍保存，并与年岁、糖尿病等因素有直接的关系。

4 OBI的检测包括HBsAg和HBV DNA检测两方面

4.1 检测试剂

大多检测试剂只针对某一基因(血清型)，对其他基因(血清型)迅速度相对较差。差别试剂对HBV DNA变异株的检测能力相差甚远。有的ELISA试剂仅接纳简单单克隆抗体，缺少对突变株的检测能力，造成漏检;而含多克隆抗体的检测试剂能有用识别种种逃逸变异株，较洪流平阻止可能泛起的漏诊。HBV熏染后泛起差别HBV-M，HBV-M血清学检查效果差别具有差别的判断意义。OBI患者通常会泛起抗-HBc和(或)抗-HBs(+)，但有时HBV-M全为(-)。电化学发光免疫剖析手艺对HBsAg检测迅速度可达0.09 ng/ml;微粒子酶免法对HBsAg检测的迅速度为0.17～0.2 ng/ml，很洪流平上阻止了HBsAg的漏检。

4.2 OBI简直诊

建议用敏感度高的PCR(如nestedPCR)来检测HBV DNA，至少接纳3对或以上针对HBV DNA差别基因区的引物举行PCR扩增，因HBV DNA水平较低，只有两对以上引物扩增同时阳性才华确诊为OBI。逆转录PCR(RT-PCR)检测OBI具有高度的迅速性。由于本钱、诊断、疗效等缘故原由，对避免HBV通过输血撒播的高迅速度剖析接纳核酸扩增手艺(NAT)仍保存争议。

5 OBI检测的临床价值

综上所述，HBV是一种严重危害人类康健的病原体，是CHB、肝硬化和原发性肝癌爆发的主要缘故原由之一。临床研究和实践充分证实，OBI是一种特殊形式的HBV隐性熏染，其爆发与诸多因素相关。差别因素在OBI爆发中的主次职位差别，差别地区和人群中的盛行纪律也不确切，而临床实践中检测要领和判断标准的纷歧致，降低了差别研究检测效果间的可比性。因此，OBI检测要领和诊断、判断标准的统一，已成为OBI研究亟待解决的主要课题。因此，迅速、准确的诊断，尤其是OBI的检出，对乙型病毒性肝炎的治疗和预后具有极其主要的价值。

摘自：《中国肝脏病杂志(电子版)》2016年 第8卷 第1期